車間空氣中磷胺衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)
本標(biāo)準(zhǔn)適用于生產(chǎn)和使用磷胺的各類企業(yè)。
1衛(wèi)生要求
車間空氣中磷胺最高允許濃度為0.02mg/m3(皮)。
2監(jiān)測檢驗方法
本標(biāo)準(zhǔn)的監(jiān)測檢驗方法采用酶化學(xué)法，見附錄A。
附錄A酶化學(xué)法(補充件)
A.1原理
磷胺對膽堿酯酶有抑制作用，而膽堿酯酶能促進(jìn)乙酰膽堿的水解，乙酰膽堿的量可用氯化鐵比色法定量測定，由此換算成磷胺的含量。
本法的檢出下限為0.1μg/mL。
A.2儀器
a.多孔玻璃板吸收管。
b.恒溫水浴箱：37±0.5℃。
c.秒表。
d.分光光度計。
e.個體采樣器。
A.3試劑
A.3.1吸收液：蒸餾水。
A.3.2緩沖液(pH=7.2)：將16.72g磷酸氫二鈉(Na2HPO4?12H2O)及2.72g磷酸二氫鉀(KH2PO4)溶于1L水中。
A.3.3氯化乙酰膽堿溶液：稱0.1000g氯化乙酰膽堿，溶于100mL緩沖液(pH=7.2)，保存于冰箱內(nèi)。
A.3.4堿性羥胺溶液：臨用前將下列溶液(1)及(2)等體積混合。
溶液(1)：13.9%鹽酸羥胺溶液，保存于冰箱內(nèi)。
溶液(2)：14%氫氧化鈉溶液。
A.3.5三氯乙酸溶液：10g三氯乙酸溶于100mL1∶2鹽酸中。
A.3.610%氯化鐵溶液：將10g氯化鐵(FeCl3?6H2O)加到0.84mL鹽酸及少量水中，微熱使溶解，然后加水至100mL。
A.3.7標(biāo)準(zhǔn)溶液：準(zhǔn)確稱取磷胺的純品，溶于甲醇中，配成1mL含100mg磷胺的貯備液，保存于冰箱中，臨用時取適量貯備液用吸收液稀釋配成1mL含2μg磷胺。
A.3.8膽堿酯酶溶液：以健康馬血清為酶原，用緩沖液稀釋成酶活力為70％～80％(見酶活力測定)，保存于冰箱中。
酶活力測定：取3mL健康馬血清置于25mL容量瓶中，用緩沖液稀釋至刻度，以此馬血清溶液按表A1配制酶活力標(biāo)準(zhǔn)管。各管分別加1mL水，置于37℃恒溫水浴箱預(yù)熱10min，然后向每管各加入1.0mL氯化乙酰膽堿溶液(每隔30s加一管)，準(zhǔn)確地在37℃下反應(yīng)30min，30min末，加入2mL堿性羥胺溶液(每隔30s加一管)，按順序從水浴中取出強烈振搖4min，然后向各管加入1mL三氯乙酸溶液，搖勻后，加入1mL氯化鐵溶液，振搖過濾，濾液在波長為520nm下測其吸光度，以水作參比液。用公式(B-X)/B×100(%)(式中B為零管的吸光度，X為各管的吸光度)，得到氯化乙酰膽堿在37℃被酶水解30min的水解百分?jǐn)?shù)，取水解百分?jǐn)?shù)為70-80%的馬血清作標(biāo)準(zhǔn)，根據(jù)馬血清含量(25mL中含純馬血清毫升數(shù))配制膽堿酯酶溶液。
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A.4采樣
取盛有5ml吸收液的多孔玻璃板吸收管做采樣管，以0.5L/min的速度抽取10L空氣。
A.5分析步驟
用吸收管中吸收液洗滌進(jìn)氣管內(nèi)壁3次，然后倒入10mL具塞比色管中，取1.0mL樣品溶液置于25mL具塞比色管中，同時按表A2配制標(biāo)準(zhǔn)管。
B管加1mL緩沖液，樣品管和標(biāo)準(zhǔn)管(包括B管)放在37℃恒溫水浴箱中預(yù)熱10min，然后各管(除B管外)加入1.0mL膽堿酯酶溶液，每隔30s加一管，在恒溫水浴箱中準(zhǔn)確反應(yīng)30min再向各管加入1.0mL氯化乙酰膽堿溶液(每隔30s加一管)，反應(yīng)30min后(不時搖動)，每管加入2mL堿性羥胺溶液(每隔30s加一管)，按順序從水浴中取出后強烈振搖4min，然后向各管中加入1mL三氯乙酸溶液，搖勻，加入1mL氯化鐵溶液，振搖過濾，濾液在波長520nm下測其吸光度，并以水作空白參比液，將所得吸光度按下式計算出膽堿酯酶被磷胺抑制的百分?jǐn)?shù)(或稱百分抑制率)。
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式中：B、C――對照管B和C管的吸光度；
X――樣品管的吸光度。
用磷胺含量對相應(yīng)的膽堿酯酶百分抑制率繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計算出樣品的百分抑制率，再由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出磷胺含量。
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式中：X――空氣中磷胺的濃度，mg/m3；
C――所取樣品溶液中磷胺的含量，μg；
V0――換算成標(biāo)準(zhǔn)狀況下的采樣體積，L。
A.6注意事項
A.6.1每一批馬血清，須測定其活力，如血清在冰箱中保存時間超過一個月，必須重新測酶活力。
A.6.2磷胺標(biāo)準(zhǔn)液只能當(dāng)日稀釋，當(dāng)日使用，放置24h后就會有部分水解，使?jié)舛冉档停滑F(xiàn)場采得樣品，應(yīng)避光保存，并須在24h內(nèi)進(jìn)行分析。
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附加說明：
本標(biāo)準(zhǔn)由全國衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)委員會勞動衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)分委會提出。
本標(biāo)準(zhǔn)由上海市衛(wèi)生防疫站負(fù)責(zé)起草。
本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人陳因久、楊士興、莊建國、殳家豪。
本標(biāo)準(zhǔn)由衛(wèi)生部委托技術(shù)歸口單位中國預(yù)防醫(yī)學(xué)科學(xué)院勞動衛(wèi)生與職業(yè)病研究所負(fù)責(zé)解釋。
篇2:車間空氣中磷胺衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)
本標(biāo)準(zhǔn)適用于生產(chǎn)和使用磷胺的各類企業(yè)。
1衛(wèi)生要求
車間空氣中磷胺最高允許濃度為0.02mg/m3(皮)。
2監(jiān)測檢驗方法
本標(biāo)準(zhǔn)的監(jiān)測檢驗方法采用酶化學(xué)法,見附錄A。
附錄A
酶化學(xué)法
(補充件)
A.1原理
磷胺對膽堿酯酶有抑制作用,而膽堿酯酶能促進(jìn)乙酰膽堿的水解,乙酰膽堿的量可用氯化鐵比色法定量測定,由此換算成磷胺的含量。
本法的檢出下限為0.1μg/mL。
A.2儀器
a.多孔玻璃板吸收管。
b.恒溫水浴箱:37±0.5℃。
c.秒表。
d.分光光度計。
e.個體采樣器。
A.3試劑
A.3.1吸收液:蒸餾水。
A.3.2緩沖液(pH=7.2):將16.72g磷酸氫二鈉(Na2HPO4·12H2O)及2.72g磷酸二氫鉀(KH2PO4)溶于1L水中。
A.3.3氯化乙酰膽堿溶液:稱0.1000g氯化乙酰膽堿,溶于100mL緩沖液(pH=7.2),保存于冰箱內(nèi)。
A.3.4堿性羥胺溶液:臨用前將下列溶液(1)及(2)等體積混合。
溶液(1):13.9%鹽酸羥胺溶液,保存于冰箱內(nèi)。
溶液(2):14%氫氧化鈉溶液。
A.3.5三氯乙酸溶液:10g三氯乙酸溶于100mL1∶2鹽酸中。
A.3.610%氯化鐵溶液:將10g氯化鐵(FeCl3·6H2O)加到0.84mL鹽酸及少量水中,微熱使溶解,然后加水至100mL。
A.3.7標(biāo)準(zhǔn)溶液:準(zhǔn)確稱取磷胺的純品,溶于甲醇中,配成1mL含100mg磷胺的貯備液,保存于冰箱中,臨用時取適量貯備液用吸收液稀釋配成1mL含2μg磷胺。
A.3.8膽堿酯酶溶液:以健康馬血清為酶原,用緩沖液稀釋成酶活力為70%~80%(見酶活力測定),保存于冰箱中。
酶活力測定:取3mL健康馬血清置于25mL容量瓶中,用緩沖液稀釋至刻度,以此馬血清溶液按表A1配制酶活力標(biāo)準(zhǔn)管。各管分別加1mL水,置于37℃恒溫水浴箱預(yù)熱10min,然后向每管各加入1.0mL氯化乙酰膽堿溶液(每隔30s加一管),準(zhǔn)確地在37℃下反應(yīng)30min,30min末,加入2mL堿性羥胺溶液(每隔30s加一管),按順序從水浴中取出強烈振搖4min,然后向各管加入1mL三氯乙酸溶液,搖勻后,加入1mL氯化鐵溶液,振搖過濾,濾液在波長為520nm下測其吸光度,以水作參比液。用公式(B-*)/B×100(%)(式中B為零管的吸光度,*為各管的吸光度),得到氯化乙酰膽堿在37℃被酶水解30min的水解百分?jǐn)?shù),取水解百分?jǐn)?shù)為70-80%的馬血清作標(biāo)準(zhǔn),根據(jù)馬血清含量(25mL中含純馬血清毫升數(shù))配制膽堿酯酶溶液。
A.4采樣
取盛有5ml吸收液的多孔玻璃板吸收管做采樣管,以0.5L/min的速度抽取10L空氣。
A.5分析步驟
用吸收管中吸收液洗滌進(jìn)氣管內(nèi)壁3次,然后倒入10mL具塞比色管中,取1.0mL樣品溶液置于25mL具塞比色管中,同時按表A2配制標(biāo)準(zhǔn)管。
B管加1mL緩沖液,樣品管和標(biāo)準(zhǔn)管(包括B管)放在37℃恒溫水浴箱中預(yù)熱10min,然后各管(除B管外)加入1.0mL膽堿酯酶溶液,每隔30s加一管,在恒溫水浴箱中準(zhǔn)確反應(yīng)30min再向各管加入1.0mL氯化乙酰膽堿溶液(每隔30s加一管),反應(yīng)30min后(不時搖動),每管加入2mL堿性羥胺溶液(每隔30s加一管),按順序從水浴中取出后強烈振搖4min,然后向各管中加入1mL三氯乙酸溶液,搖勻,加入1mL氯化鐵溶液,振搖過濾,濾液在波長520nm下測其吸光度,并以水作空白參比液,將所得吸光度按下式計算出膽堿酯酶被磷胺抑制的百分?jǐn)?shù)(或稱百分抑制率)。
式中:B、C——對照管B和C管的吸光度;
*——樣品管的吸光度。
用磷胺含量對相應(yīng)的膽堿酯酶百分抑制率繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,計算出樣品的百分抑制率,再由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出磷胺含量。
式中:*——空氣中磷胺的濃度,mg/m3;
C——所取樣品溶液中磷胺的含量,μg;
V0——換算成標(biāo)準(zhǔn)狀況下的采樣體積,L。
A.6注意事項
A.6.1每一批馬血清,須測定其活力,如血清在冰箱中保存時間超過一個月,必須重新測酶活力。
A.6.2磷胺標(biāo)準(zhǔn)液只能當(dāng)日稀釋,當(dāng)日使用,放置24h后就會有部分水解,使?jié)舛冉档?現(xiàn)場采得樣品,應(yīng)避光保存,并須在24h內(nèi)進(jìn)行分析。
附加說明:
本標(biāo)準(zhǔn)由全國衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)委員會勞動衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)分委會提出。
本標(biāo)準(zhǔn)由上海市衛(wèi)生防疫站負(fù)責(zé)起草。
本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人陳因久、楊士興、莊建國、殳家豪。
本標(biāo)準(zhǔn)由衛(wèi)生部委托技術(shù)歸口單位中國預(yù)防醫(yī)學(xué)科學(xué)院勞動衛(wèi)生與職業(yè)病研究所負(fù)責(zé)解釋。